細(xì)胞膜熒光探針是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△4 m的理想熒光探針?？梢詸z測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時(shí)，細(xì)胞膜熒光探針聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時(shí)，細(xì)胞膜熒光探針不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)細(xì)胞膜熒光探針為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來衡量線粒體去極化的比例。
線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過細(xì)胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降，同時(shí)也可以用細(xì)胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測指標(biāo)。單體的Zui大激發(fā)波長為 515nm，Zui大發(fā)射波長為529nm；聚合物的Zui大激發(fā)波長為585nm，Zui大發(fā)射波長為590nm 。實(shí)際觀察時(shí)，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。
染色步驟：
1、于6-，12或24-孔板上進(jìn)行細(xì)胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。 注：進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)時(shí)的細(xì)胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細(xì)胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2、取0.5 mL細(xì)胞懸液至無菌的離心管內(nèi)。
3、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
4、用0.5 mL
細(xì)胞膜熒光探針工作液重懸細(xì)胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。
5、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
6、用2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
7、重復(fù)步驟6。
8、用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，即可進(jìn)行后續(xù)的流式分析。
注意事項(xiàng)：
1、如果一次使用量較小，需把每管再適當(dāng)進(jìn)行分裝，盡量避免反復(fù)凍融。
2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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