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技術(shù)文章首頁 > 技術(shù)文章 談?wù)劷M織細(xì)胞固定液常見的固定方法有哪幾種
  • 談?wù)劷M織細(xì)胞固定液常見的固定方法有哪幾種
  • 點(diǎn)擊次數(shù):4525 更新時(shí)間:2016-11-11
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  • 組織細(xì)胞中的大多數(shù)肽類激素、蛋白物質(zhì)為水溶性,在進(jìn)行病理研究之前必需固定。多聚甲醛能很好地保存組織的抗原性和細(xì)微結(jié)構(gòu),與福爾馬林相比更適用于小動(dòng)物組織標(biāo)本的固定,也非常適合組織和細(xì)胞的光鏡病理或免疫化學(xué)研究。組織細(xì)胞固定液為4%多聚甲醛的緩沖溶液,pH為中性。用于組織和細(xì)胞標(biāo)本的固定。.
     
    組織細(xì)胞固定液固定方法有物理固定和化學(xué)固定兩類,物理固定可采用空氣干燥(血涂片)、驟冷(在液氮中迅速冷凍)或微波固定等;化學(xué)固定有浸潤(rùn)法(immersion method)和灌流法(perfusion method)。灌流法適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中對(duì)缺氧敏感的器官,如神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸等取材。
     
    組織細(xì)胞固定液固定的方法 
        1.浸泡法 
    這是zui常用的固定法,將取好的組織直接浸泡在固定液中,固定的時(shí)間一般在2~24h它適用于動(dòng)物標(biāo)本、尸檢標(biāo)本及臨床活檢標(biāo)本等。 
        2.蒸氣法 
        比較小而薄的標(biāo)本可用鋨酸或甲醛蒸氣固定。主要用于血液、細(xì)胞涂片以及某些薄膜組織的固定。具體方法:在一有蓋培養(yǎng)皿內(nèi)滴人1%一2%鋨酸水溶液3滴,將涂片放人其中,固定30s至lmin左右,立即水洗后進(jìn)行染色。 
        3.注射、灌注固定法 
        主要適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的固定。將固定液注入血管,以達(dá)到充分的固定。經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)組織或全身 
    (1)局部灌注固定 固定肺組織可將固定液從氣管或支氣管注入,注入速度不要太快,用力均勻,注入量適當(dāng),以免脹破肺泡。固定眼球組織可從眼后房注人固定液。固定肝、腎組織則可從肝、腎動(dòng)脈注入固定液,同時(shí)切斷其靜脈使得血液排出。腦組織的固定,必須先麻醉動(dòng)物,分離頸動(dòng)脈,注射器的針尖向著頭部的方向注入固定液。 
    (2)全身灌注固定 較大的動(dòng)物往往采取輸液方法,將固定液從一側(cè)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈輸入,將另一側(cè)相應(yīng)的靜脈切開放血。固定液的輸入量因動(dòng)物而異,兔、貓約500~1000ml,猴、狗約1000—2000ml。 
        4.微波固定法 
    近幾年來微波固定法一直可見報(bào)道。經(jīng)微波固定的組織具有收縮較小、核膜清晰、染色質(zhì)均勻、分辨清晰等特點(diǎn),但必須嚴(yán)格控制微波固定的時(shí)間和溫度。
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